关键词：肝微粒体，药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI），细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450），时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）

药物-药物相互作用（Drug-drug interaction, DDI）是临床上引发严重不良反应甚至死亡的主要原因之一。因此，对DDI发生的可能性、严重性及其影响进行科学评估尤为重要。细胞色素P450酶（Cytochrome P450, CYP450）作为体内重要的药物代谢酶，其药物相互作用的评估主要涵盖代谢表型研究、酶诱导作用评估及酶抑制作用评估。其中，药物对CYP450酶的抑制作用可以分为可逆性抑制（Reversible Inhibition）和时间依赖性抑制（Time-dependent inhibition, TDI）。与可逆性抑制相比，TDI带来更为严重的用药安全问题，因此逐年受到监管机构和药物研发者的重视。

一、CYP酶介导的时间依赖性抑制介绍

CYP酶介导的酶抑制指的是某些化合物能够抑制特定CYP450代谢酶的活性，导致在联合用药时一些药物的代谢减慢、清除率降低及暴露量增加，从而引发安全隐患。根据抑制机制的不同，药物对CYP450的抑制可以分为可逆性和时间依赖性抑制。TDI一般指候选药物的CYP酶代谢产物通过共价键与酶结合，导致酶的不可逆性失活，这种抑制效应在去除抑制剂后不会立刻消失，而呈现出时间依赖性的特征。TDI可能导致药物暴露量的非线性增长及血药浓度的显著升高，给患者带来严重的健康威胁。

最著名的实例是抗高血压药物米贝拉地尔（mibefradil），它是一种钙离子通道阻滞剂，因其时间依赖性抑制CYP3A4而导致联合用药的其他药物显著升高血药浓度，最终引发严重不良反应及患者死亡，因此不得不撤出市场。这一案例展示了TDI的影响不仅对患者健康造成威胁，还对制药企业构成重大挑战和威胁。

二、时间依赖性抑制的体外试验评估

时间依赖性抑制的评估一般采用人肝微粒体作为体外孵育系统。目前常用的TDI评估方法包括Single-point法、IC50位移法（IC50 shift）和Kinact/Ki法。

Single-point法

试验设计：一个或两个试验浓度（通常为1uM/10uM），一个探针底物浓度；进行NADPH预孵育一个时间点；该方法适用于早期和高通量筛选。

评价标准：相对剩余活性＜80%提示有潜在的TDI风险。

IC50位移法（IC50 shift）

试验设计：系列试验浓度，一个探针底物浓度，进行NADPH预孵育30分钟；相对精准的评估，适合粗略的DDI预测。

评价标准：IC50位移≥15提示存在TDI风险。

Kinact/Ki法

试验设计：系列试验浓度和探针底物浓度，进行多时间点的NADPH预孵育；此法可用于DDI的精准预测。

评价标准：结合临床药代动力学（PK）数据，计算R2值以评估临床意义。

三、IPHASE时间依赖性抑制试验数据分析

IPHASE作为体外研究生物试剂的领导者，采用IC50位移法验证不同抑制剂对人肝微粒体CYP3A4的时间依赖性抑制（TDI）作用。实验设定包括预孵育时间和多种浓度的抑制剂。通过液相-串联质谱（LC-MS/MS）检测代谢产物的生成量，从而计算IC50值并分析结果。

结果分析

在不同实验组中，观察到TDI作用的不同表现，并根据IC50值的变化趋势分析其依赖性及代谢机制。这些研究有助于理解和预测药物的相互作用，为新药研发提供重要依据。

四、IPHASE相关产品

药物相互作用是新药研发的重要评价标准，而CYP酶介导的时间依赖性抑制作用评估则是其中不可或缺的部分。IPHASE依托多年的研发经验，推出了多种高纯度、高活性的人、猴、犬、大鼠等不同种属的肝微粒体产品，为广大研究人员在CYP酶介导的TDI及其他研究方向提供支持。

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