尊龙凯时-人生就是博提供的人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45的培养说明书如下。
一、细胞培养条件
细胞名称:人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45
生长特性:悬浮生长
冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)
培养体系:1640培养基(含NAHCO3 15g/L)+ 10% FBS + 1% P
传代方法:首次建议1:2传代。传代情况每2天换液。
备注:使用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养。如果对比效果不佳,建议直接购买我们的完全培养基。
二、细胞收到后的处理
收到细胞后,应将其培养至良好状态,灌满完全培养液并封好瓶口,确保运输过程顺利。收到细胞时,用75%酒精消毒细胞瓶表面,然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以便稳定细胞状态,随后进行处理。请在显微镜下观察细胞的生长情况并拍照记录(建议使用40x、100x和200x放大倍数各拍一张)。前三天的照片是重要的售后依据,未提供照片默认为状态良好。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代
当细胞汇合度未超过80%时,收集培养瓶中的完全培养液至离心管中,保留5ml培养基,放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%,可进行如下传代步骤:
- 弃去上清,使用不含钙、镁的PBS轻洗细胞1-2次。
- 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml,放置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态,若细胞变圆并脱落,迅速取回操作台,轻敲培养瓶并添加5ml以上完全培养基以终止消化。
- 轻轻吹打使细胞完全脱落后,吸出悬液并转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清,加入1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2比例分瓶(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml每瓶,最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
b、细胞冻存
- 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
- 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,观察细胞收缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化,轻轻吹打后转移悬液至15ml离心管,进行1000RPM离心5分钟。
- 弃上清,加入1ml无血清冻存液(货号:C7001),混匀后转入冻存管中。
- 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱,若需转移至液氮,需在-80℃保存24小时以上后再转入液氮罐中。
c、细胞复苏
- 从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),迅速放入37℃水浴中解冻,直至无晶体形成,然后用75%酒精擦拭管外壁。
- 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。
- 弃去上清,加入5ml完全培养基重悬,并接种至T25培养瓶,置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
- 第二天,更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
在运输过程中,部分细胞可能会因粘附不牢而发生脱落,这属于正常现象。如脱落较多,建议将培养液收集至离心管,进行1000RPM离心5分钟,以收集沉淀并进行后续培养。
五、售后条款
1)可重发的情况
- 细胞在运输过程中丢失或瓶身破损,符合条件的可重发。
- 细胞污染问题需在收到产品48小时内提出真实实验结果,经核实后可重发。
- 干冰运输细胞复苏后48小时内大部分细胞未存活,需提供清晰的细胞状态照片,可重发。
- 如运输途中的细胞出现污染,需在指定时间内提交有效证明,可重发。
- 如在收到产品7天内提供真实实验结果以验证细胞活性,可重发。
2)不予重发的情况
- 客户造成的细胞污染,不予重发。
- 错误操作导致的细胞状态不佳,不予重发。
- 非推荐培养体系导致的问题,不予重发。
- 未提供培养前三天照片的情况,不予重发。
- 接受处理后的细胞状态不佳的,不予重发。
- 在收到后2天内未告知的情况,不予重发。
对于细胞的处理与实验,我们始终坚持高品质的服务和支持,确保您的实验顺利进行。 尊龙凯时-人生就是博将持续为您提供优质的细胞资源和技术支持。