尊龙凯时-人生就是博提供的人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45的培养说明书如下。

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基（含NAHCO3 15g/L）+ 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议1:2传代。传代情况每2天换液。

备注：使用无菌离心管收集培养基以便进行对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，确保运输过程顺利。收到细胞时，用75%酒精消毒细胞瓶表面，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态，随后进行处理。请在显微镜下观察细胞的生长情况并拍照记录（建议使用40x、100x和200x放大倍数各拍一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片默认为状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行如下传代步骤：

1. 弃去上清，使用不含钙、镁的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶并添加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞收缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后转移悬液至15ml离心管，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转移至液氮，需在-80℃保存24小时以上后再转入液氮罐中。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无晶体形成，然后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会因粘附不牢而发生脱落，这属于正常现象。如脱落较多，建议将培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，以收集沉淀并进行后续培养。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 细胞在运输过程中丢失或瓶身破损，符合条件的可重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提出真实实验结果，经核实后可重发。
3. 干冰运输细胞复苏后48小时内大部分细胞未存活，需提供清晰的细胞状态照片，可重发。
4. 如运输途中的细胞出现污染，需在指定时间内提交有效证明，可重发。
5. 如在收到产品7天内提供真实实验结果以验证细胞活性，可重发。

2）不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 错误操作导致的细胞状态不佳，不予重发。
3. 非推荐培养体系导致的问题，不予重发。
4. 未提供培养前三天照片的情况，不予重发。
5. 接受处理后的细胞状态不佳的，不予重发。
6. 在收到后2天内未告知的情况，不予重发。

对于细胞的处理与实验，我们始终坚持高品质的服务和支持，确保您的实验顺利进行。 尊龙凯时-人生就是博将持续为您提供优质的细胞资源和技术支持。