人结肠腺癌细胞LS1034培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议1:2传代

备注：在换液时，使用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在将细胞培养至良好状态后，及时灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，然后将其放入超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后，再进行后续处理。建议显微镜下观察细胞生长情况并拍照保存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如果未提供照片，默认收到时状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，则收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml的完全培养基，然后放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即可开始传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS轻轻洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶，放入37℃的培养箱中消化1-2分钟，立即在显微镜下观察细胞的消化情况。当细胞大部分变圆并脱落时，迅速取出培养瓶，轻敲几下后加入至少5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保其完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml的完全培养基以重悬细胞。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS洗涤一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩并变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞使之完全脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，进行1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，将沉淀的细胞与1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001）混匀，然后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护装备），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶形成，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，快速在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。
4. 第二天，需更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中容易出现脱落，这是正常现象。如脱落情况较多，可将所有培养液收集至离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。收集沉淀后，加入1-2ml胰酶轻轻吹打以消化，消化1-2分钟后用5ml的完全培养基终止反应，再进行离心，弃去上清并重悬于1-2ml完全培养基中。最后按1:2比例进行分瓶传代，继续培养。

五、售后政策

1）细胞问题的重发情况

可以重发以下情况的细胞：细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等问题；如细胞在收到后48小时内出现污染，请提供真实实验结果以便核实重发；常温运输细胞若在静置24小时内复苏后绝大多数细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片；其他情况依具体评判标准而定。

2）不予重发的情况

若细胞污染由客户造成、客户操作不当导致细胞状态不佳、未按推荐体系培养导致细胞状态不佳，等情形，不予重发。此外，如收到细胞后2天内未告知问题，将视为客户接受合格产品。

如需了解更多信息及支持，请联系我们并欢迎访问尊龙凯时-人生就是博了解有关实验室细胞培养的相关产品与服务。