一、实验准备：Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061

在进行生物医疗研究时，选用合适的酶类是至关重要的，Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061为我们提供了一个优质的实验选择。

二、酰胺酶单位的定义

酰胺酶单位表示在30℃、pH 9.5条件下，每分钟能够产生1μmol对硝基苯胺的酶力。我们可以通过以下公式计算每瓶的酶单位：

AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 1)

其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

在进行实验时，务必使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，防止捕获任何蛋白质。建议使用质谱分析用凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701）。

实验步骤如下：

1. 进行电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切割出蛋白质片段，放入微量离心管中。
3. 使用质谱分析用凝胶染色试剂盒中的脱色溶液对凝胶进行脱色处理。
4. 往试管中加入300μL乙醇，搅拌30分钟。
5. 除去乙醇，使用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解在100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时。
8. 室温冷却后，使用等量的50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵，暗处恒温45分钟并涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段，持续10分钟。
10. 用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段，持续15分钟。
12. 用300μL乙醇再次干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，进行15分钟的真空干燥。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放入37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl (pH 8.5)条件下过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内振荡以抽提多肽。
17. 加入5%甲酸/50%乙醇，20分钟内振荡以抽提更多多肽。
18. 如有必要，使用SpeedVac浓缩抽提的多肽。
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如有需要，将多肽浓缩至2μL。
21. 最后，加入基质以进行质谱分析。

四、购买渠道

Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等产品可通过北京百奥创新科技有限公司购买。欢迎随时进行咨询，了解更多关于生物医疗研究的产品信息。放眼生物技术领域，选择尊龙凯时-人生就是博, 是您最佳的合作伙伴。